1、问：多肽如何合成？

答：使用标准Fmoc 化学。多肽由氨基酸组合而成。a－氨基Fmoc保护集团可以确保在每一步反应中只有一个氨基酸被添加。某些氨基酸需要侧链保护，Fmoc氨基酸可保护侧链。循环后Fmoc基团被移除。举例说明：在结合一个氨基酸后，暴露一个自由氨基，序列中下一个Fmoc保护的氨基酸通过羧基结合。最后一个循环后，当整个多肽被组装完成，侧链保护被去掉。

 

2、问：多肽需在什么温度保存？

答：我们推荐在–20°C保存多肽。

 

3、问：为何合成多肽的羧基端是酰胺化的？

答：这是为了防止在天然蛋白中可能发生非自然的改变，同时防止多肽自身成环。

 

4、问：我的多肽溶解不好，该怎么办？

答：根据你的氨基酸序列的不同，溶解性会有差别。通常蜗旋或超声有助于溶解。对于疏水性多肽，可以尝试使用有机溶剂如DMSO溶解。

 

5、问：什么是序列漂移/移码？

答: 序列漂移/移码是指：如果肽链＃1的蛋白氨基酸序列为1－12，那么我们每次移码两个氨基酸，第二条肽链序列将是3－14。序列漂移也可以是每次移码一个氨基酸，但是我们发现2或3个移码是最理想的。

 

6、问:通常每次PEP-HIT筛选，你们可以检测到多少候选多肽（抑制剂/激动剂）？

答：取决于不同的筛选类型，一般我们可以检测5－20个结合多肽。

 

7、问：多肽阵列中的肽链长度一般为多少?

答：肽链可以长至20个氨基酸，不过我们发现12个氨基酸为理想长度。

 

8、问：如何发现蛋白质结合位点/抗原表位？

答：例如：以下为蛋白质重叠多肽中的连续3个多肽（每次移码两个氨基酸）： 

HRFACGQPMNSI

FACGQPMNSICG

CGQPMNSICGLW

如果以上3个多肽与待测蛋白质（抗体）都呈阳性反应，则共有的结合位点（抗原表位）为GQPMNSI。

 

9、问：我获得PEP ARRAY的芯片，请问我如何检测？

答：取决于你的实验设计，大多数情况下可使用Western blot的实验方案进行下游检测。检测方法可采用多种方法，基于酶的可见光，化学发光或荧光显色，类似于western blot的显色反应。

 

10、问：请问我如何排除非特异性的结合？

答：我们推荐使用5％脱脂奶粉（TPBS或TTBS缓冲液）进行非特异性封闭。如果客户要自行检测，则推荐的实验操作方案会随芯片一道给予客户。